在水產(chǎn)養(yǎng)殖過(guò)程中，因藥物使用、疾病因素、溶氧、pH值、氨、亞硝酸鹽、硫化氫等水質(zhì)因子以及養(yǎng)殖密度（如高密度稱(chēng)為擁擠脅迫）、飼料的選擇與投喂、運(yùn)輸暴露等都會(huì)對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物造成應(yīng)激反應(yīng)。
應(yīng)激發(fā)生后，輕則導(dǎo)致魚(yú)厭食或餌料系數(shù)偏高，高則導(dǎo)致魚(yú)發(fā)病死亡，因而控制或減少魚(yú)類(lèi)應(yīng)激，對(duì)于獲得高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)至關(guān)重要。

本試驗(yàn)旨在驗(yàn)證愛(ài)綠寧（水產(chǎn)動(dòng)物專(zhuān)用型）對(duì)鳊魚(yú)生長(zhǎng)與抗應(yīng)激能力的影響。

1  材料與方法

1.1  試驗(yàn)魚(yú)及試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)用鳊魚(yú)（Megalobrama amblycephala）為當(dāng)年人工繁殖的同一批苗種，購(gòu)自重慶市榮昌縣梅石壩漁場(chǎng)，試驗(yàn)在西南大學(xué)水產(chǎn)系室內(nèi)循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)中進(jìn)行。試驗(yàn)前暫養(yǎng)一周，每天早、中、晚飼喂對(duì)照
組飼料3次至飽食。試驗(yàn)采用的養(yǎng)殖設(shè)施為長(zhǎng)方形玻璃缸(總體積0.4m3、水體體積0.2 m3)。養(yǎng)殖試驗(yàn)期間均連續(xù)充氧（除投餌期間外）。

試驗(yàn)開(kāi)始前停飼 24 h。選擇體重相近(5.2±0.4)g、體格健壯的幼魚(yú)1200尾，隨機(jī)分成4組，每組三個(gè)缸、每缸100尾，具體分組見(jiàn)表1。每天早、中、晚投喂3次，至飽食，投喂結(jié)束后 30 min，吸出池內(nèi)殘
餌及糞便。養(yǎng)殖試驗(yàn)共進(jìn)行42d，試驗(yàn)期間水溫25.0±1.0℃，pH7.5±0.5，溶氧≥5mg/L，氨氮<0.2mg/L，余氯<0.1mg/L。

1.2  試驗(yàn)飼料

飼料由西南大學(xué)水產(chǎn)系水產(chǎn)動(dòng)物繁育和健康養(yǎng)殖研究中心制作。配制飼料前，飼料原料均經(jīng)粉碎機(jī)粉碎并全部過(guò)60目篩，按配方要求均勻混合成粉料，在30℃鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)干燥24 h，置冰箱0℃保存。愛(ài)綠
寧（水產(chǎn)專(zhuān)用型）產(chǎn)品由北京愛(ài)綠生物科技有限公司提供。具體配方組成和營(yíng)養(yǎng)成分分析見(jiàn)表2。

1.3  生長(zhǎng)性能相關(guān)指標(biāo)

1.3.1 生長(zhǎng)速度

以魚(yú)質(zhì)量的鮮重變化、增重率和特定生長(zhǎng)率等表示生長(zhǎng)速度。增重率( ％ ) ＝ [( Wt-W0) ／W0]×100％；特定生長(zhǎng)率( ％/d )＝[(LnW t-LnWo) /d]×100%，W0和Wt分別表示養(yǎng)殖開(kāi)始和結(jié)束時(shí)的魚(yú)體質(zhì)量
（g）。

1.3.2  飼料利用效率

以飼料系數(shù)和蛋白效率表示，飼料系數(shù)=飼料投喂量 / 魚(yú)體增重量；蛋白效率=( Wt-W0) ／F×P％，F(xiàn)指飼料消耗量，P%指飼料蛋白質(zhì)含量。

1.4  抗應(yīng)激機(jī)能測(cè)定

1.4.1 運(yùn)輸應(yīng)激

試驗(yàn)設(shè)計(jì)  鳊魚(yú)養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后停止喂食24 h。AL1、AL2和AL3組的各重復(fù)缸中分別取出5尾魚(yú)放入魚(yú)苗運(yùn)輸袋中充入純氧并打包；對(duì)照組則各重復(fù)缸中分別取出10尾，每個(gè)運(yùn)輸袋中放入5尾鳊魚(yú)充入純氧
并打包（具體見(jiàn)表3），用皮卡車(chē)運(yùn)輸2 h。運(yùn)輸后立即將魚(yú)快速深度麻醉后采集血樣。運(yùn)輸過(guò)程中皮卡車(chē)平均速度為50～60 km／h。

1.4.2 暴露應(yīng)激

魚(yú)的取樣方法與運(yùn)輸應(yīng)激相同，取樣后置于空氣中同等養(yǎng)殖溫度下暴露3min。

取血、樣品處理及測(cè)定與運(yùn)輸應(yīng)激相同。

1.4.3  嗜水氣單胞菌攻毒試驗(yàn)

嗜水氣單胞菌（BYK-038）毒株來(lái)源于上海海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)部漁業(yè)動(dòng)植物病原庫(kù)，病原菌按病原庫(kù)推薦培養(yǎng)方法在28°C條件下培養(yǎng)24h后，無(wú)菌生理鹽水洗滌后，置離心機(jī)中1000 g條件下離心10min。去
上清液，用無(wú)菌生理鹽水調(diào)整細(xì)菌濃度至5×107 cfu。按0.10mL/尾的劑量注射到鳊魚(yú)腹腔，每個(gè)試驗(yàn)組30尾魚(yú)，10尾/重復(fù)，其后連續(xù)7天記錄其死亡率。

1.5 試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，先對(duì)數(shù)據(jù)作單因素方差分析(ANOVA)，處理間若有顯著差異，再作Duncan's多重比較，P<0.05表示差異顯著。

2  試驗(yàn)結(jié)果

2.1 對(duì)生產(chǎn)性能的影響

愛(ài)綠寧以100～200g/t劑量添加后，鳊魚(yú)的生長(zhǎng)性能指標(biāo)如表4所示。從表中可以看出：1）愛(ài)綠寧顯著提高了鳊魚(yú)的增重率和特定生長(zhǎng)率（P<0.05），提高幅度分別為21.8%～30.9%、11.7%～15.9%，
但各AL組之間無(wú)顯著差異（P>0.05）；2）蛋白效率也因愛(ài)綠寧的補(bǔ)充而顯著提高了25.8%～34.0%，并隨著愛(ài)綠寧補(bǔ)充量的增加而呈現(xiàn)逐漸提高的趨勢(shì)，AL3組較對(duì)照組和AL1組均有顯著提高（P<0.05）；
3）而飼料系數(shù)則與蛋白效率呈現(xiàn)出完全相反的變化規(guī)律，有效降低20.6%～25.3%；4）愛(ài)綠寧的補(bǔ)充對(duì)鳊魚(yú)成活率較對(duì)照組均有顯著提高（P<0.05）。

2.2 運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)鳊魚(yú)的影響

2.2.1 鳊魚(yú)運(yùn)輸后血清皮質(zhì)醇激素含量的變化

第21d：經(jīng)過(guò)2h的運(yùn)輸后，除陽(yáng)性對(duì)照組有1尾死亡外，陰性對(duì)照、AL1、AL2和AL3組均未出現(xiàn)死亡。在運(yùn)輸?shù)倪^(guò)程中，陽(yáng)性對(duì)照組魚(yú)在氧氣袋中，水波的動(dòng)蕩下表現(xiàn)出煩躁不安，激烈游動(dòng)，用頭不斷沖撞
袋壁，試圖逃離這種環(huán)境。而AL1、AL2和AL3組鳊魚(yú)在運(yùn)輸初期也表現(xiàn)出竄出水面等較激烈反應(yīng)，持續(xù)約15~20min即恢復(fù)平靜，靜臥袋底或輕輕游動(dòng)。運(yùn)輸結(jié)束后，皮質(zhì)醇激素含量檢測(cè)結(jié)果表明，陽(yáng)性對(duì)照組、
AL1、AL2和AL3組的魚(yú)血清皮質(zhì)醇激素含量較陰性對(duì)照組均顯著提高（P<0.05），但AL1、AL2和AL3組的血清皮質(zhì)醇激素含量比陽(yáng)性對(duì)照組顯著降低（P<0.05）（見(jiàn)表5）。

第42d：其趨勢(shì)與第21d相同。

2.2.2 鳊魚(yú)運(yùn)輸后血清蛋白和酶活性的變化

第21d：對(duì)2h運(yùn)輸應(yīng)激后鳊魚(yú)血清總蛋白（TP）和白蛋白（AP）測(cè)定表明，AL1、AL2、AL3和陽(yáng)性對(duì)照組魚(yú)血清TP和AP均較陰性對(duì)照組顯著提高（P<0.05），但AL1、AL2和AL3的TP和AP較陽(yáng)性對(duì)照組顯
著降低（P<0.05）。

陽(yáng)性對(duì)照組的鳊魚(yú)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）和堿性磷酸酶（ALT)較陰性對(duì)照組顯著提高（P<0.05），但AL2和AL3的血清GPT和ALT與陰性對(duì)照組相比無(wú)顯著差異（P>0.05）。

第42d：各組間TP、AP、GPT和ALT變化趨勢(shì)與第21d基本一致。

2.2.3 鳊魚(yú)運(yùn)輸后血清中其它幾種物質(zhì)含量的比較

第21d：從表5中可以看出，除AL3外，運(yùn)輸組的魚(yú)血糖（GLU）與陰性對(duì)照相比有顯著增加（P<0.05），但均顯著低于陽(yáng)性對(duì)照組（P<0.05）。

陽(yáng)性對(duì)照組的血清甘油三酯（TG）和血清總膽固醇（TC）較陰性對(duì)照組顯著提高（P<0.05），愛(ài)綠寧補(bǔ)充組的血清TG和TC則與陰性對(duì)照組無(wú)顯著差異（P>0.05）。

第42d：GLU在各組間的變化趨勢(shì)與第21d同；愛(ài)綠寧補(bǔ)充組的血清TG和TC與陰性對(duì)照組無(wú)顯著差異（P>0.05）。

2.3  鳊魚(yú)暴露后血清中其它幾種物質(zhì)含量的比較

第42d：從表6中可以看出，鳊魚(yú)暴露應(yīng)激血清學(xué)變化呈現(xiàn)出與運(yùn)輸應(yīng)激幾乎一致的變化規(guī)律，表明飼料中添加愛(ài)綠寧對(duì)鳊魚(yú)具有很好的抗暴露應(yīng)激作用。 

2.4  細(xì)菌攻毒后成活率

    未經(jīng)嗜水氣單胞菌攻毒的陰性對(duì)照組在觀察的7天內(nèi)未出現(xiàn)死亡。其余各組從第2d開(kāi)始出現(xiàn)死亡，除陽(yáng)性對(duì)照和AL2組外，各組至第5d后停止死亡。AL1、AL2和AL3組的鳊魚(yú)成活率分別為73%，66%和70%，
均顯著高于陽(yáng)性對(duì)照組鳊魚(yú)成活率（50%）。

3  小結(jié)

3.1  愛(ài)綠寧對(duì)鳊魚(yú)生產(chǎn)性能的影響

愛(ài)綠寧的補(bǔ)充顯著提高了鳊魚(yú)的增重率和特定生長(zhǎng)率，但100、150和200g/t的補(bǔ)充量之間沒(méi)有顯著差異；愛(ài)綠寧的補(bǔ)充能顯著提高鳊魚(yú)對(duì)飼料蛋白的利用效率，且隨補(bǔ)充量的增加而提高，飼料系數(shù)則與蛋
白效率相反，呈逐步降低趨勢(shì)；愛(ài)綠寧補(bǔ)充組的鳊魚(yú)成活率較對(duì)照組顯著提高。

3.2  愛(ài)綠寧對(duì)鳊魚(yú)運(yùn)輸應(yīng)激的緩解作用

3周和6周養(yǎng)殖后均進(jìn)行了運(yùn)輸應(yīng)激，陽(yáng)性對(duì)照組的鳊魚(yú)血清皮質(zhì)醇、白蛋白、血清總蛋白和血糖含量等指標(biāo)均顯著高于陰性對(duì)照組，各愛(ài)綠寧添加組的鳊魚(yú)血清相應(yīng)指標(biāo)也基本均顯著高于陰性對(duì)照組，但
與較陽(yáng)性對(duì)照組比較則顯著降低。陽(yáng)性對(duì)照組的鳊魚(yú)經(jīng)過(guò)運(yùn)輸應(yīng)激后，多項(xiàng)生化指標(biāo)如谷丙轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、甘油三酯和膽固醇等均呈較大幅度上升，而愛(ài)綠寧補(bǔ)充組則上升幅度減小，甚至與陰性對(duì)照組
無(wú)顯著差異。表明飼料中補(bǔ)充愛(ài)綠寧后，在運(yùn)輸應(yīng)激中具有很好的抗應(yīng)激效果。

3.3  愛(ài)綠寧對(duì)鳊魚(yú)暴露應(yīng)激的緩解作用

3周和6周養(yǎng)殖試驗(yàn)之后的3min暴露應(yīng)激發(fā)現(xiàn)，愛(ài)綠寧補(bǔ)充組的鳊魚(yú)血清皮質(zhì)醇激素、白蛋白、血清總蛋白和血糖含量等指標(biāo)比陰性對(duì)照組均顯著提高，但較陽(yáng)性對(duì)照組有顯著降低（P<0.05）。陽(yáng)性對(duì)照
組的鳊魚(yú)經(jīng)過(guò)暴露應(yīng)激后，多項(xiàng)生化指標(biāo)如谷丙轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、甘油三酯和膽固醇等均呈較大幅度上升，而愛(ài)綠寧補(bǔ)充組則上升幅度減小，甚至與陰性對(duì)照組無(wú)顯著差異。表明補(bǔ)充愛(ài)綠寧對(duì)抗暴露應(yīng)激
效果良好。

3.4  愛(ài)綠寧對(duì)鳊魚(yú)抗病能力的影響

經(jīng)嗜水氣單胞菌攻毒后，各組鳊魚(yú)均出現(xiàn)了死亡，成活率較陰性對(duì)照組均顯著降低。但與此同時(shí)，愛(ài)綠寧補(bǔ)充組的鳊魚(yú)攻毒后成活率相比陽(yáng)性對(duì)照組顯著提高，表明愛(ài)綠寧能顯著提高鳊魚(yú)的抗病能力。

（西南大學(xué)水產(chǎn)動(dòng)物繁育和健康養(yǎng)殖研究中心 唐冬梅 黃玉萍 鄭宗林）