1  試驗(yàn)背景

加州鱸原名大口黑鱸，分類學(xué)上屬鱸形目，太陽(yáng)魚(yú)科，原產(chǎn)美國(guó)加利福尼亞州密西西比河水系，是一種肉質(zhì)鮮美、抗病力強(qiáng)、生長(zhǎng)迅速、易起捕、適溫較廣的名貴肉食性魚(yú)類。我國(guó)于上世紀(jì)80年
代引進(jìn)加州鱸魚(yú)苗，并人工繁殖成功。2018年全國(guó)加州鱸產(chǎn)量達(dá)43.21萬(wàn)噸，成為名副其實(shí)的明星魚(yú)。雖然現(xiàn)在加州鱸的苗種馴化、養(yǎng)殖、飼料技術(shù)等日趨成熟，但普遍還存在放養(yǎng)密度過(guò)大、投喂過(guò)
量、水質(zhì)底質(zhì)惡化、頻繁消毒用藥、投喂冰鮮魚(yú)等情況。這些情況都會(huì)導(dǎo)致加州鱸發(fā)生肝臟病變，造成魚(yú)體免疫力下降、代謝紊亂、易感染其他病原性疾病，死亡率增高，有的塘口死亡率可高達(dá)50%
以上，給養(yǎng)殖戶造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。

另外，加州鱸養(yǎng)殖中為了追求生長(zhǎng)速度，過(guò)度投喂飼料或者是冰鮮，由于加州鱸攝食量大，投喂的飼料或冰鮮也多，過(guò)多的投喂造成浪費(fèi)會(huì)殘留在水體中造成水體的污染，當(dāng)水質(zhì)變化，溶氧低等
引起魚(yú)體抵抗力下降，會(huì)使得加州鱸患腸炎病的幾率大大增加。因此加州鱸的肝腸問(wèn)題亟待解決。

愛(ài)綠舒^?主要成份組成：黃芪提取物、杜仲提取物、金銀花提取物、苦木提取物等植提復(fù)方，具有“抑菌殺菌與抗病毒+提高免疫與抗病力+保護(hù)胃腸黏膜屏障”三位一體綜合改善肝腸健康，提高
抗病力、促生長(zhǎng)的效果。本試驗(yàn)以加州鱸為研究對(duì)象，評(píng)價(jià)愛(ài)綠舒在加州鱸養(yǎng)殖中的應(yīng)用效果，重點(diǎn)考察愛(ài)綠舒對(duì)加州鱸生長(zhǎng)性能、免疫功能和肝腸健康的改善作用。

2  試驗(yàn)?zāi)康?/span>

研究飼料中添加不同水平愛(ài)綠舒對(duì)加州鱸生長(zhǎng)、消化、免疫功能及抗應(yīng)激的影響，確定愛(ài)綠舒的應(yīng)用效果及飼料中最佳添加水平。

3  試驗(yàn)設(shè)計(jì)

3.1  試驗(yàn)對(duì)象

選擇加州鱸為試驗(yàn)動(dòng)物，初均重5.3g左右。

3.2  試驗(yàn)組別

每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)25尾加州鱸，試驗(yàn)周期8周。      

養(yǎng)殖條件：每天2次（8:00和16:00）表觀飽食投喂。整個(gè)養(yǎng)殖系統(tǒng)不間斷充氣, 水體溶解氧含量≥6mg/L, 氨氮為（0.15±0.05）mg/L, pH 為（7.2±0.2）, 溫度為（25±2）℃ 。養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)期間采用自然光
照周期。 

利用試劑盒分析血清免疫指標(biāo)、肝臟抗氧化和消化酶指標(biāo)，高通量測(cè)序分析腸道微生物組成，組織切片法和電鏡分析肝臟及腸道組織形態(tài)。

4  試驗(yàn)結(jié)果

4.1 愛(ài)綠舒對(duì)加州鱸生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，飼料中添加0.03%、0.05%、0.075%和0.1%愛(ài)綠舒，養(yǎng)殖試驗(yàn)期間加州鱸存活率均為100%，增重率、特定生長(zhǎng)率、采食量均出現(xiàn)不同程度的提高。其中，飼料中添加0.075%愛(ài)綠舒的加州鱸
增重率、特定生長(zhǎng)率、采食量均顯著增加（P＜0.05），增重率較對(duì)照組增加了9.62%。飼料中添加愛(ài)綠舒的加州鱸平均肥滿度有一定程度提高，魚(yú)體形態(tài)更為美觀。這些結(jié)果提示飼料中添加一定量的愛(ài)綠舒能
提高加州鱸采食量和生長(zhǎng)性能，改善形體指標(biāo)。

4.2 愛(ài)綠舒對(duì)加州鱸血清免疫指標(biāo)的影響

由表3可知，飼料中添加0.03%、0.05%、0.075%和0.1%的愛(ài)綠舒均顯著提高了加州鱸血清AKP活性（P＜0.05），實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組血清ACP和IgM差異不顯著，添加0.05%、0.075%和0.1%的愛(ài)綠舒血清
補(bǔ)體C3活性有一定上升。這些結(jié)果提示愛(ài)綠舒能一定程度上提高加州鱸免疫功能。

4.3 愛(ài)綠舒對(duì)加州鱸肝臟消化和代謝酶活性的影響

由表4可知，飼料中添加0.03%、0.05%、0.075%和0.1%的愛(ài)綠舒各組淀粉酶活性無(wú)顯著差異，脂肪酶活性呈不同程度上升，其中0.03%組顯著上升（P＜0.05）。飼料中添加0.03%和0.1%的愛(ài)綠舒肝臟
胰蛋白酶活性顯著下降（P＜0.05），飼料中添加0.05%、0.075%的愛(ài)綠舒肝臟胰蛋白酶活性無(wú)顯著影響。飼料中添加愛(ài)綠舒加州鱸肝臟ALT活性均顯著高于對(duì)照組，AST活性高于對(duì)照組，但差異不顯著。這
些結(jié)果提示飼料中添加一定含量的愛(ài)綠舒能夠改善加州鱸肝臟代謝。

4.4 愛(ài)綠舒對(duì)加州鱸肝臟抗氧化能力的影響

由表5可知，飼料中添加0.03%、0.05%、0.075%和0.1%的愛(ài)綠舒均能提高加州鱸肝臟總氧化酶活性，其中0.075%愛(ài)綠舒組試驗(yàn)結(jié)果最為明顯，總抗氧化能力活性較對(duì)照組提高了71.4%，并明顯降低了
加州鱸肝臟MDA含量。0.05%愛(ài)綠舒能顯著提高加州鱸肝臟GSH-PX活性，0.03%愛(ài)綠舒能顯著提高加州鱸肝臟SOD活性（P＜0.05）。這些結(jié)果提示飼料中添加愛(ài)綠舒可提高加州鱸抗氧化能力。

4.5 愛(ài)綠舒對(duì)加州鱸肝臟組織形態(tài)的影響

根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)采樣情況（圖1），采集的肝臟顏色總體呈暗紅色，形態(tài)正常，均未出現(xiàn)脂肪肝現(xiàn)象，就整體而言，試驗(yàn)組的肝臟體積較對(duì)照組稍大一點(diǎn)，其他并無(wú)顯著差異。

由圖2可觀察，加州鱸伸入肝臟實(shí)質(zhì)內(nèi)結(jié)締組織較少肝組織致密，肝小葉間界線不是十分明顯，低倍鏡下可大致區(qū)分出肝小葉和門管區(qū)結(jié)構(gòu)。肝小葉以中央靜脈為中心，肝細(xì)胞索在其周圍呈不規(guī)則的放
射狀排列，膽細(xì)胞索間的血竇較為明顯。結(jié)果提示在飼料中添加愛(ài)綠舒并不會(huì)對(duì)肝臟的組織形態(tài)造成影響。

4.6 愛(ài)綠舒對(duì)加州鱸腸道組織結(jié)構(gòu)及其屏障的影響

根據(jù)圖3顯示，加州鱸腸道黏膜為縱行黏膜褶皺，黏膜上皮表面具有許多分泌孔及較多腺體導(dǎo)管的開(kāi)口，似鱗片狀，連接緊密。腸黏膜分布著密集排列的腸絨毛，絨毛呈拇指狀或扁平狀。腸上皮表面呈
腦回狀分布有許多分泌顆粒，細(xì)胞游離面分布著豐富的微絨毛，其中0.075%試驗(yàn)組較對(duì)照組褶皺更加緊密，腸絨毛更為密集，分布著更為豐富的微絨毛。

腸上皮屏障是由腸上皮細(xì)胞和細(xì)胞間的緊密連接所構(gòu)成，緊密連接是處于細(xì)胞間最頂端的結(jié)構(gòu)，負(fù)責(zé)細(xì)胞與細(xì)胞間的粘附，極性以及對(duì)一些電解質(zhì)的通透性。一旦粘膜屏障被破壞，粘膜下層將會(huì)暴露于
大量的病原微生物下，從而加劇腸道炎癥的發(fā)展，因此維持緊密連接蛋白的表達(dá)正常對(duì)于保護(hù)腸道屏障，具有重要意義。因此我們檢測(cè)了空腸緊密連接蛋白相關(guān)基因ZO-1、Claudin-1和Claudin-4基因相對(duì)
表達(dá)水平，從圖4中可以看出，與正常對(duì)照組比較，0.03%、0.05%和0.075%愛(ài)綠舒處理組空腸緊密連接蛋白相關(guān)基因ZO-1、Claudin-1和Claudin-4的基因相對(duì)表達(dá)水平均有不同程度的提高，其中0.075%
愛(ài)綠舒處理組空腸緊密連接蛋白相關(guān)基因ZO-1、Claudin-1和Claudin-4的基因相對(duì)表達(dá)水平提高最為顯著（P＜0.05）?？梢?jiàn)，飼料中添加愛(ài)綠舒可以改善加州鱸腸道組織結(jié)構(gòu)，并且有利于提高腸道物理屏
障相關(guān)基因的表達(dá)。 

4.7 愛(ài)綠舒對(duì)加州鱸腸道微生物的影響

由圖5可知，在門水平，各組加州鱸腸道的優(yōu)勢(shì)菌為厚壁菌門、擬桿菌門、變形菌門、酸桿菌門、放線菌門等，0.075%試驗(yàn)組厚壁菌門、擬桿菌門豐度略低于對(duì)照組，而梭桿菌門豐度明顯上升。在屬水
平，0.075%試驗(yàn)組鯨桿菌（常見(jiàn)有益菌）豐度明顯上升。PCoA分析和β-多樣性顯著性分析（圖6）均表明，試驗(yàn)組與對(duì)照組加州鱸腸道菌群β-多樣性存在一定差異，尤其是0.075%試驗(yàn)組差異較大?？梢?jiàn)，
飼料中添加愛(ài)綠舒對(duì)加州鱸腸道菌群結(jié)構(gòu)產(chǎn)生了一定的調(diào)節(jié)作用。

5 試驗(yàn)結(jié)論

5.1  飼料中添加0.03-0.10%的愛(ài)綠舒均能提高加州鱸采食量、生長(zhǎng)性能和肥滿度。0.075%添加效果最佳，增重率較對(duì)照組提高了9.62%。

5.2 飼料中添加0.03-0.10%的愛(ài)綠舒能改善加州鱸免疫功能、抗氧化能力和肝臟代謝。

5.3 飼料中添加0.075%的愛(ài)綠舒能有效改善加州鱸腸道組織結(jié)構(gòu)和菌群結(jié)構(gòu)，上調(diào)腸道物理屏障相關(guān)基因的表達(dá)。

      綜上，加州鱸飼料中愛(ài)綠舒的建議添加量為0.075%（750g/T）。

（集美大學(xué)）