1 試驗(yàn)?zāi)康?br/>

植物提取物類產(chǎn)品多數(shù)通過(guò)提高腸道免疫功能、黏膜修復(fù)以及抑制球蟲發(fā)育等而起到一定的抗球蟲作用。艾美耳球蟲對(duì)雞腸道破壞嚴(yán)重，嚴(yán)重混合感染時(shí)病變可擴(kuò)展到腸道大部分范圍，不但會(huì)影響雞
生長(zhǎng)發(fā)育，還會(huì)影響到養(yǎng)雞業(yè)生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)效益。本試驗(yàn)主要通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)并觀察各項(xiàng)指標(biāo)，分析植物抗球蟲劑愛(ài)綠爽與雞球蟲四價(jià)疫苗在黃雞上聯(lián)合使用的協(xié)同作用，從而為生產(chǎn)上雞球蟲病的科學(xué)防控提供
依據(jù)。

2 材料與方法

2.1 材料

供試藥物：愛(ài)綠爽（Ⅰ型）、甲基鹽霉素。

供試雞：黃雞雞苗在無(wú)球蟲環(huán)境下飼養(yǎng)，飲用潔凈自來(lái)水，在1日齡分組、稱重，根據(jù)分組情況分別飼喂含有愛(ài)綠爽、甲基鹽霉素以及不含抗球蟲藥的全價(jià)粉料。

供試飼料：基礎(chǔ)日糧為按黃羽肉雞標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)的不含抗球蟲藥的全價(jià)粉料。

供試強(qiáng)毒卵囊：四種艾美耳球蟲（柔嫩、毒害、巨型、堆型艾美耳球蟲）強(qiáng)毒卵囊，由佛山市正典生物技術(shù)有限公司分離、鑒定和擴(kuò)繁。

供試球蟲疫苗：佛山市正典生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的四價(jià)苗（含柔嫩、毒害、巨型、堆型艾美耳球蟲）。

試驗(yàn)時(shí)間：2019.09.10～10.29，共計(jì)50天。

2.2 方法

2.2.1 分組與免疫

將1日齡試驗(yàn)黃羽肉雞隨機(jī)分成15組，每組為100只（3個(gè)重復(fù)組），按表1處理，地面平養(yǎng)，養(yǎng)至5日齡，免疫組接種球蟲四價(jià)疫苗1羽份/雞，具體如表1所示。于免疫后3周（26日齡）每組各取20只雞
稱重、籠養(yǎng)并進(jìn)行攻蟲試驗(yàn)（其中不處理對(duì)照組每組取40只雞，分為不攻蟲的陰性對(duì)照組20只和攻蟲的陽(yáng)性對(duì)照組20只）。

2.2.2 觀察指標(biāo)

（1）球蟲卵囊數(shù)監(jiān)測(cè)：

分別于12日齡、19日齡、26日齡、33日齡攻毒前每組收集4堆小腸糞和1堆盲腸糞進(jìn)行卵囊監(jiān)測(cè)（判斷免疫后卵囊排出量是否正常，愛(ài)綠爽對(duì)免疫過(guò)程中卵囊排出量的影響）。

（2）存活率、增重和料肉比：

①存活率：

存活率（%）＝存活雞數(shù)÷開(kāi)始雞數(shù)×100%

②增重情況：

對(duì)于黃羽肉雞試驗(yàn)，分別于1日齡、21日齡、51日齡等階段進(jìn)行分組稱重（包括料重和雞重），計(jì)算各階段和全過(guò)程的平均增重、相對(duì)增重和料肉比。

1)平均增重=（最后存活的雞只數(shù)的總重/存活的雞只數(shù)）-（開(kāi)始的雞只的總重/開(kāi)始時(shí)的雞只數(shù)）

2)相對(duì)增重率=（用藥組或感染不用藥組的平均增重/不感染不用藥組的平均增重）×100%

3)料肉比= 消耗飼料總量（kg）／增重總量（kg）

（3）通過(guò)攻蟲試驗(yàn)觀察抗球蟲效果的指標(biāo)

26日齡時(shí)每組抽取20只，除第1、2、3組外，黃羽肉雞試驗(yàn)其他各組（包括陽(yáng)性對(duì)照組）每雞經(jīng)口感染柔嫩、毒害、巨型、堆型艾美耳球蟲強(qiáng)毒孢子化卵囊各6萬(wàn)、6萬(wàn)、6萬(wàn)、5萬(wàn)共23萬(wàn)。指標(biāo)如下：

①存活率：

存活率（%）＝存活雞數(shù)÷開(kāi)始雞數(shù)×100%

②卵囊計(jì)數(shù)：

分別收集各組試驗(yàn)雞感染后足144～168 h的糞便，用麥?zhǔn)嫌?jì)數(shù)板法計(jì)每克糞便卵囊數(shù)，檢測(cè)各糞便中的卵囊含量，計(jì)算卵囊產(chǎn)量和卵囊值。

卵囊值：當(dāng)陰性組或用藥組 OPG 值與陽(yáng)性組 OPG 值的比值分別為小于 1%、1%～25%、25%～50%、50%～75%和 75%～100%時(shí)，卵囊值分別為 0，5，10，20 和 40。

③病變計(jì)分：

攻蟲后5天每組隨機(jī)宰殺5只雞，逐羽觀察小腸和盲腸病變，將腸道病變分為0～+4五個(gè)等級(jí)。

④根據(jù)相對(duì)卵囊產(chǎn)量（ROP）、病變記分減少率（RLS）評(píng)價(jià)耐藥性和抗球蟲效果：

a.相對(duì)卵囊產(chǎn)量（ROP）=（感染用藥組卵囊產(chǎn)量/感染不用藥組卵囊產(chǎn)量）×100%；

ROP<15%，判為耐藥陰性；ROP≥15%，判為耐藥陽(yáng)性。

b.病變記分減少率（RLS）；

RLS =（感染不用藥組平均病變記分－感染用藥組平均病變記分）/ （感染不用藥組平均病變記分）×100%；

RLS<50%，判為耐藥陽(yáng)性；RLS≥50%，判為耐藥陰性。其中RLS值小于等于30%，判為完全耐藥；RLS值在31～50%之間，判為部分耐藥。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 地養(yǎng)雞觀察指標(biāo)

3.1.1 地養(yǎng)雞球蟲卵囊數(shù)監(jiān)測(cè)

從表2和圖1所示，不處理對(duì)照組卵囊數(shù)量隨日齡增長(zhǎng)，表明外界存在野毒蟲株；26日齡前愛(ài)綠爽不免疫組和化藥對(duì)照組卵囊數(shù)均低于不處理對(duì)照組，表明愛(ài)綠爽和化藥甲基鹽霉素對(duì)球蟲感染有抑制作
用；26日齡后隨著球蟲感染數(shù)量的增加，抑制作用減弱。

免疫對(duì)照組在監(jiān)測(cè)期間卵囊排量一直處于上升趨勢(shì)，可能受外界球蟲的侵襲和堆型艾美耳球蟲強(qiáng)繁殖力影響，堆型艾美耳球蟲免疫力的建立延后。

愛(ài)綠爽免疫組在免疫后3周到達(dá)排卵高峰后平穩(wěn)下降，表明愛(ài)綠爽免疫組黃羽肉雞已建立良好的免疫保護(hù)力。免疫后7日齡后，在外界球蟲的侵襲下，愛(ài)綠爽免疫組卵囊數(shù)一直低于免疫對(duì)照組，表明愛(ài)
綠爽對(duì)球蟲的感染具有抑制作用，同時(shí)不影響球蟲免疫力的建立，體現(xiàn)愛(ài)綠爽與疫苗聯(lián)合使用具有一定的優(yōu)勢(shì)，在臨床上能減少疫苗反應(yīng)，在野毒存在條件下也能建立良好的免疫力。

3.1.2 地養(yǎng)雞存活率、相對(duì)增重率和料肉比：

表3所示,地養(yǎng)黃羽肉雞的存活率依次為愛(ài)綠爽不免疫組=化藥對(duì)照組＞免疫對(duì)照組＞愛(ài)綠爽免疫組＞不處理對(duì)照組。不處理對(duì)照組存活率為94.3%，可能受外界球蟲感染影響，所有試驗(yàn)組存活率均高
于不處理對(duì)照組。1-20日齡相對(duì)增重率方面由高到低為愛(ài)綠爽不免疫組＞愛(ài)綠爽免疫組＞免疫對(duì)照組＞化藥對(duì)照組。21-50日齡以及1-50日齡相對(duì)增重率由高到低為化藥對(duì)照組＞愛(ài)綠爽免疫組＞愛(ài)綠爽
不免疫組＞免疫對(duì)照組，從數(shù)據(jù)穩(wěn)定性方面看愛(ài)綠爽免疫組表現(xiàn)更為穩(wěn)定。

表4數(shù)據(jù)顯示,地養(yǎng)雞1-20日齡料肉比并無(wú)差異；21-50日齡料肉比由低到高為愛(ài)綠爽免疫組=化藥對(duì)照組＜愛(ài)綠爽不免疫組＜免疫對(duì)照組=不處理對(duì)照組，這說(shuō)明愛(ài)綠爽和疫苗聯(lián)合使用提高了料肉比。

3.2 免疫后攻蟲試驗(yàn)觀察抗球蟲效果指標(biāo)

免疫后試驗(yàn)雞轉(zhuǎn)籠養(yǎng)并經(jīng)口感染柔嫩、毒害、巨型、堆型艾美耳球蟲強(qiáng)毒混合孢子化卵囊23萬(wàn)檢驗(yàn)免疫保護(hù)效果，指標(biāo)檢測(cè)如下：

3.2.1 病變計(jì)分

表5顯示，愛(ài)綠爽免疫組在腸道各部位的病變計(jì)分均低于免疫對(duì)照組和愛(ài)綠爽不免疫組，表明愛(ài)綠爽和疫苗聯(lián)合使用即建立良好的免疫力，也減輕了球蟲免疫產(chǎn)生的病變。

3.2.2 存活率、相對(duì)卵囊產(chǎn)量（ROP）、病變記分減少率（RLS）。

表6所示，存活率各試驗(yàn)組均高于陽(yáng)性對(duì)照組；相對(duì)卵囊產(chǎn)量由低到高依次為愛(ài)綠爽免疫組＜免疫對(duì)照組＜化藥對(duì)照組＜愛(ài)綠爽不免疫組。愛(ài)綠爽免疫組的卵囊產(chǎn)量最低。這說(shuō)明愛(ài)綠爽和疫苗聯(lián)合
使用建立了良好的免疫力，從而起到了良好的抗球蟲效果。

病變減少率方面由低到高依次為化藥對(duì)照組＜愛(ài)綠爽不免疫組＜免疫對(duì)照組＜愛(ài)綠爽免疫組，由此可見(jiàn)愛(ài)綠爽和疫苗聯(lián)合使用可以大大減少雞球蟲疫苗反應(yīng)及野毒蟲株感染對(duì)腸道造成的損傷。

華南農(nóng)業(yè)大學(xué)寄生蟲教研室

項(xiàng)目人員：姜亞杰、張杭、蔡曉懿、陳曉丹、陸肖、范雪梅、馮詩(shī)喻、陳思彤

簽審人：翁亞彪教授、林瑞慶研究員

時(shí)間：2019-12